TIRF—荧光寿命系统的探索

全内反射荧光（TIRF）显微镜能极大的促进观察的对比度，因此对于盖玻片附近的荧光非常敏感。通常情况下，紧挨盖玻片玻璃的光学切片约100nm。TIRF不会打扰细胞的活性，因此能追踪生物分子、在分子水平研究它们的动态行为和相关作用。TIRF能让科学家选择性的观察到细胞膜的结构和运输过程，囊泡释放和运输过程、细胞粘合、分泌、膜蛋白的动态和分配过程，以及蛋白与受体的相互作用。TIRF与频域FLIM的独特组合观能够测量玻片附近小粘着斑的生命周期。

生命周期（伪彩） 强度（灰度）

上图为TIRF          下图为Widefield                 

宽视野显微镜下，这些细胞（荷兰Leiden大学的Ms.S.E.Devedec提供）的小粘着斑和核里都表达了Dsh2-GFP，然而，用TIRF, 只有粘着斑里激发出了荧光。

因为非焦光线都从粘着斑的平均寿命下发出，所以TIRF模式下的荧光寿命成像测量更精确。

以上展示的图像由Nikon TE2000U宽场显微镜拍摄，配备Lambert Instruments荧光寿命附件（LIFA）。使用LED468nm光源，能为TIRF产生足够的荧光寿命图像。

生命周期（伪彩） 强度（灰度）

上图为TIRF          下图为Widefield                 

Cells (kindly provided by Ms. S.E. Le Devedec, Leiden University, The Netherlands) expressing dSH2-GFP in small focal adhesions as well as in the nuclei.

图像由Olympus TIRFM拍摄，配备Lambert Instruments荧光寿命附件（LIFA）。使用473nm 20mW调制二极管激光做光源，能确保TIRF得到足够的荧光寿命图像。

生命周期（伪彩） 强度（灰度）

TIRF        

Cells (kindly provided by Ms. S.E. Le Devedec, Leiden University, The Netherlands) expressing dSH2-GFP in small focal adhesions as well as in the nuclei.

以上图像由Nikon激光TIRF拍摄，配备Lambert Instruments荧光寿命附件（LIFA）。使用473nm 20mW调制二极管激光做光源，能确保TIRF得到足够的荧光寿命图像。